Imunoexpressão de clic4, α-sma, e-caderina e vimentina em lesões odontogênicas epitelias benígnas / Immunoexpression of clic4, α-sma, e-cadherin and vimentin in benign epithelial odontogenic lesions

As lesões odontogênicas epiteliais benignas constituem um grupo heterogêneo de lesões. A proteína CLIC4 atua na regulação dos processos de parada de crescimento e apoptose, participando também do processo de transdiferenciação dos fibroblastos em miofibroblastos que passam a expressar α-SMA. Além disso, a expressão de CLIC4 pode interferir no processo de transição epitélio-mesenquima (TEM) em neoplasias. Este trabalho avaliou a imunoexpressão de CLIC4, α-SMA, E-caderina e Vimentina em ameloblastomas (AM) (n = 16), ceratocistos odontogênicos (n = 20) e tumores odontogênicos adenomatóides (TOA) (n = 8). A análise da expressão imunoistoquímica das proteínas CLIC4, E-caderina e vimentina no componente epitelial das lesões e de CLIC4 e α-SMA no tecido conjuntivo foi realizada de forma semi-quantitativa por um avaliador previamente calibrado. A expressão no componente epitelial de CLIC4 foi analisada separadamente no núcleo e no citoplasma, bem como a marcação de E-caderina que foi avaliada na membrana e no citoplasma. As comparações dos percentuais de imunorreatividade em relação aos grupos estudados foram realizadas por meio dos testes não paramétricos de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney. Possíveis correlações entre a expressão de CLIC4, α-SMA, E-caderina e Vimentina foram avaliadas por meio do teste de correlação de Spearman. O nível de significância foi estabelecido em 5% (p < 0,05). Foram observados diferentes padrões de marcação entre os grupos analisados, observando-se que a imunoexpressão exclusivamente citoplasmática da CLIC4 no componente epitelial dos AM (p < 0,001) e TOA (p < 0,001) foi significativamente superior a dos CO, não demonstrarando significância estatística entre os AM e TOA. A imunoexpressão (nuclear e citoplasmática) da CLIC4 no revestimento epitelial CO foi significativamente superior à encontrada no componente epitelial dos AM (p < 0,001) e dos TOA (p < 0,001). A imunoexpressão estromal de CLIC4 foi significativamente superior nos AM (p = 0,009) e CO (p = 0,004) quando comparados aos TOA. A imunoexpressao de α-SMA significativamente maior em AM (p = 0,016) e CO (p = 0,034) quando comparados aos TOA. Para a imunoexpressão membranar da E-caderina em CO foi significativamente superior em comparação à encontrada nos AM (p = 0,009) e nos TOA (p = 0,024). Foi observada maior imunoexpressão de E-caderina (membranar e citoplasmática) nos COs, quando comparados aos AM (p < 0,001) e aos TOAs (p < 0,001). A expressão de Ecaderina citoplasmática foi significativamente maior nos AM e TOA (p < 0,001) quando comparados aos CO. Observou-se diferença estatisticamente significativa na imunoexpressão de vimentina entre os casos de AM e os casos de TOA (p = 0,038) e CO (p < 0,001), bem como entre o TOA e CO (p < 0,001). As correlações testadas entre os escores das proteínas estudadas evidenciou que no grupo dos AM foi possível evidenciar moderada correlação positiva e estatisticamente significativa (r = 0,527; p = 0,036) entre a expressão citoplasmática da CLIC4 e a expressão citoplasmática da E-caderina. Também foi verificada fraca correlação negativa e estatisticamente significativa (r = -0,499; p = 0,049) entre a expressão núcleo-citoplasmática da CLIC4 e a expressão citoplasmática da E-caderina nos AM. Além disso, uma moderada correlação positiva e estatisticamente significativa entre a expressão estromal da CLIC4 e a expressão da α-SMA nos AM (r = 0,648; p = 0,007) e nos CO (r = 0,541; p = 0,014). Foi observada forte correlação negativa e estatisticamente significativa (r = -0,813; p < 0,001) entre a expressão da E-caderina e a expressão da vimentina nos AM. Os resultados deste estudo sugerem um potencial envolvimento de CLIC4 no processo de transdiferenciação de miofibroblastos, e que a presença destas células é mais frequentemente associada a lesões de comportamento biológico mais agressivo como os AM e CO, além de uma possível atuação desta proteína na regulação do ciclo celular e na TEM nas lesões estudadas (AU).

Benign epithelial odontogenic lesions constitute a heterogeneous group of lesions. the CLIC4 protein acts in the regulation of growth arrest and apoptosis processes, also participating in the process of transdifferentiation of fibroblasts Into myofibroblasts that begin to express α-SMA. Furthermore, CLIC4 expression can interfere with the epithelialmesenchymal transition (EMT) process in neoplasms. This work evaluated the immunoexpression of CLIC4, α-SMA, e-cadherin and vimentin in ameloblastomas (AM) (n = 16), odontogenic keratocysts (OK) (n = 20) and adenomatoid odontogenic tumors (AOT) (n = 8). The analysis of the immunohistochemical expression of the proteins CLIC4, ecadherin and vimentin in the epithelial component of the lesions and of CLIC4 and α-SMA in the connective tissue was carried out in a semi-quantitative way by a previously calibrated evaluator. Expression in the epithelial component of CLIC4 was analyzed separately in the nucleus and cytoplasm, as well as e-cadherin labeling, which was evaluated in the membrane and cytoplasm. Comparisons of the percentages of immunoreactivity in relation to the studied groups were carried out using the nonparametric kruskal-wallis and mann-whitney tests. Possible correlations between the expression of CLIC4, α-SMA, e-cadherin and vimentin were evaluated using the spearman correlation test. The significance level was set at 5% (p < 0.05). Different staining patterns were observed between the groups analyzed, observing that the exclusively cytoplasmic immunoexpression of CLIC4 in the epithelial component of AM (p < 0.001) and AOT (p < 0.001) was significantly higher than that of OK, not demonstrating statistical significance between the AM and AOT. The immunoexpression (nuclear and cytoplasmic) of CLIC4 in the co epithelial lining was significantly higher than that found in the epithelial component of AM (p < 0.001) and AOT (p < 0.001). Stromal CLIC4 immunoexpression was significantly higher in AM (p = 0.009) and OK (p = 0.004) when compared to AOT. The immunoexpression of α-SMA is significantly higher in AM (p = 0.016) and OK (p = 0.034) when compared to AOT. For e-cadherin membrane immunoexpression in co was significantly higher compared to that found in AM (p = 0.009) and AOT (p = 0.024). Greater immunoexpression of e-cadherin (membrane and cytoplasmic) was observed in OK, when compared to AM (p < 0.001) and AOT (p < 0.001). Cytoplasmic ecadherin expression was significantly higher in AM and AOT (p < 0.001) when compared to OK. A statistically significant difference in vimentin immunoexpression was observed between cases of AM and cases of AOT (p = 0.038) and OK (p < 0.001), as well as between AOT and OK (p < 0.001). The correlations tested between the scores of the proteins studied showed that in the am group it was possible to demonstrate a moderate positive and statistically significant correlation (r = 0.527; p = 0.036) between the cytoplasmic expression of clic4 and the cytoplasmic expression of e-cadherin. A weak and statistically significant negative correlation (r = -0.499; p = 0.049) was also found between the nucleus-cytoplasmic expression of clic4 and the cytoplasmic expression of e- cadherin in AM. Furthermore, a moderate positive and statistically significant correlation between the stromal expression of CLIC4 and the expression of α-SMA in AM (r = 0.648; p = 0.007) and OK (r = 0.541; p = 0.014). Additionally, a strong negative and statistically significant correlation (r = -0.813; p < 0.001) was observed between the expression of ecadherin and the expression of vimentin in AM. The results of this study suggest a potential involvement of CLIC4 in the myofibroblast transdifferentiation process, and that the presence of these cells is more frequently associated with lesions with more aggressive biological behavior such as AM and OK, in addition to a possible role of this protein in the regulation of cell cycle and EMT in the lesions studied (AU).

A Relação entre Compartimentos de Volume Extracelular e Matriz Metaloproteinase 2 na Remodelação do Ventrículo Esquerdo após o Infarto do Miocárdio / The Relationship between Extracellular Volume Compartments and Matrix Metalloproteinases-2 in Left Ventricular Remodeling after Myocardial Infarction

Resumo Fundamento: As matrizes metaloproteinases (MMPs) podem afetar o volume extracelular (VEC) e seus compartimentos, e isso pode oferecer informações mais detalhadas sobre o mecanismo de remodelação adversa (RA) do ventrículo esquerdo (VE) após o infarto agudo do miocárdio (IM). Objetivos: Investigar o papel que as alterações (Δ) nos compartimentos de VEC (volume matriz (MVi) e volume celular (CVi)) desempenham no desenvolvimento de RA após o IM, e sua relação com as expressões de MMP-2. Métodos: Um total de noventa e dois pacientes com primeiro IM passaram por exames de imagens por ressonância magnética cardiovascular 3 Tesla realizados 2 semanas (linha de base) e 6 meses após o IM. Medimos o mapeamento T1 com sequências MOLLI. O VEC foi obtido após o realce pelo gadolínio. O VEC e a massa do VE foram usados para calcular o MVi e o CVi. A RA foi definida como um aumento de ≥ 12% no volume diastólico final do VE em 6 meses. As MMPs foram medidas usando-se um sistema de imunoensaio multiplex em grânulos no primeiro dia (linha de base) e 2 semanas após o IM. Um P valor <0,05 foi aceito como estatisticamente significativo. Resultados: Os níveis de linha de base de MVi média e VEC médio foram mais altos no grupo com RA em comparação com o grupo sem RA (42,9±6,4 vs. 39,3±8,2 %, p= 0,037; 65,2±13,7 vs. 56,7±14,7 mL/m2, p=0,010; respectivamente). Os níveis de CVi eram semelhantes entre os grupos. Foi encontrada uma correlação positiva entre os níveis de linha de base de MMP-2 e os níveis de linha de base de VEC (r=0,535, p<0,001) e MVi (r=0,549, p<0,001). O aumento dos níveis de ΔMVi foi um preditor independente da RA (RC=1,03, p=0,010). O ΔMVi teve um desempenho diagnóstico superior quando comparado ao ΔVEC na previsão do (ΔAUC: 0,215±0,07, p<0,001). Conclusão: Níveis altos de MVi estão associados à RA, e o ΔMVi foi um preditor independente de RA. Isso pode estar associado à liberação de MMP-2 devido ao aumento da resposta inflamatória.

Abstract Background: Matrix metalloproteinases (MMPs) can affect myocardial extracellular volume (ECV) and its compartments, and this can provide more detailed information about the mechanism of adverse left ventricular (LV) remodeling (AR) after acute myocardial infarction (MI). Objectives: To investigate the role of changes (Δ) in ECV compartments (matrix volume (MVi) and cell volume (CVi)) in the development of AR after MI, and their relationship with MMP-2 expressions. Methods: Ninety-two first MI patients who underwent 3 Tesla cardiovascular magnetic resonance imaging performed 2 weeks (baseline) and 6 months post-MI. We measured T1 mapping with MOLLI sequences. ECV was performed post-gadolinium enhancement. ECV and LV mass were used to calculate MVi and CVi. AR was defined as an increase of ≥ 12% in LV end-diastolic volume in 6 months. MMPs were measured using a bead-based multiplex immunoassay system at first day (baseline) and 2 weeks post-MI. P <0.05 was accepted as statistically significant. Results: Mean ECV and mean MVi baseline levels were higher in AR group compared to without AR group (42.9±6.4 vs 39.3±8.2%, p= 0.037; 65.2±13.7 vs 56.7±14.7 mL/m2, p=0.010; respectively). CVi levels was similar between groups. A positive correlation was found between baseline levels of MMP-2 and baseline levels of ECV (r=0.535, p<0.001) and MVi (r=0.549, p<0.001). Increased ΔMVi levels was independently predictor of AR (OR=1.03, p=0.010). ΔMVi had superior diagnostic performance compared to ΔECV in predicting AR (ΔAUC: 0.215±0.07, p<0.001). Conclusion: High MVi levels are associated with AR, and ΔMVi was independently predictor of AR. This may be associated with MMP-2 release due to increased inflammatory response.

Estudo da imunoexpressão de proteínas envolvidas na transição epitélio-mesênquima em tumores de glândula salivar / Study of the immunoexpression of proteins involved in the epithelial-mesenchymal transition in salivary gland tumors

Os tumores de glândula salivar (TGS) apresentam notável complexidade clínica e biológica, razão para a qual muitos estudos investigam os eventos envolvidos na sua progressão. Uma das dinâmicas envolvidas na invasão tumoral de diversos tipos de carcinomas é a transição epitélio-mesênquima (TEM). Neste processo, as células epiteliais sofrem transição para um estado mesenquimal móvel, favorecendo a invasão e metástase. Sendo assim, esta pesquisa analisou a expressão imuno-histoquímica de E-caderina, Twist1, Snail1, α-SMA, metaloproteinases de matriz 9 (MMP-9) e Vimentina (VM) em 90 casos de TGS, correlacionando-os entre si e com parâmetros clinicopatológicos. Foram selecionados 20 casos de Adenoma pleomórfico (AP), 20 casos de Carcinoma mucoepidermoide (CME), 20 casos de Carcinoma adenoide cístico (CAC), 10 casos de Adenocarcinoma polimorfo (ACP), 10 casos de Carcinoma epitelial-mioepitelial (CEME) e 10 casos de Carcinoma ex-adenoma pleomórfico (CexAP). A análise de E-caderina, Twist1, Snail1 foi realizada em parênquima tumoral sendo observado o percentual de células positivas (PP), com escores variando de 0 a 4, e a intensidade de expressão (IE), cujos escores variaram de 0 a 3. A avaliação de MMP-9 foi realizada em parênquima e estroma tumoral, também avaliando-se a PP e a IE, ambos baseados em escores que variaram de 0 a 3. A marcação para α-SMA e VM foi analisada em região de estroma tumoral. Células positivas para α-SMA foram contabilizadas em 10 campos, obtendo-se, então a média. A VM foi avaliada de forma qualitativa, utilizando-se 4 escores de acordo com a IE e se a marcação é difusa ou focal. Os dados obtidos foram analisados no software Statistical Package for Social Science, GraphPad Prism e STATA. O nível de significância de 5% foi adotado para os testes estatísticos. Foi verificada menor imunomarcação de E-caderina nos APs em relação às neoplasias malignas de glândula salivar (NMGS). Observou-se baixa imunoexpressão de Twist1 e Snail1 em APs. Em relação a expressão nuclear do Twist1, constatou-se maior expressão nas neoplasias malignas quando comparadas aos APs. Ainda, Twist1 em núcleo foi correlacionado à expressão citoplasmática de E-caderina nas NMGS. No que concerne aos parâmetros clinicopatológicos, esta proteína se relacionou estatisticamente com maiores chances de óbito. Foi evidenciada baixa imunoexpressão de Snail1 entre as NMGS. No entanto, na análise dos CACs, foi verificada maior expressão nuclear na variante sólida em relação às demais. A expressão de MMP-9 em parênquima demonstrou correlação positiva com Twist1 citoplasmático e Snail1nuclear nas NMGS. A MMP-9 também apresentou correlação positiva na comparação da sua imunoexpressão em região de parênquima e de estroma. A VM se apresentou como um biomarcador a ser considerado na avaliação clínica dos pacientes, já que esta apresentou relação significativa com tamanho do tumor (T3-T4) e maior frequência de óbito. Ademais, a alta expressão desta proteína se apresentou como um fator preditivo independente para piores taxas de sobrevida global (SG). A avaliação dos demais fatores clinicopatológicos apresentou estágios clínicos avançados como indicador de valor prognóstico independente para menores taxas de SG, enquanto que para a sobrevida livre da doença, estes foram a localização em glândula salivar menor e presença de metástase à distância. Os resultados deste estudo sugerem que o processo de TEM pode estar relacionado ao estágio de diferenciação celular em APs e à progressão tumoral nas NMGS. Ressalta-se, também, maior participação de Twist1 e MMP-9 no cenário da TEM em tumores malignos de glândula salivar, além da possibilidade de utilização da VM como indicador de valor prognóstico (AU).

Salivary gland tumors (SGTs) present remarkable clinical and biological complexity; therefore, many studies investigate the events involved in their progression. One of the dynamics involved in the tumor invasion of different types of carcinomas is the epithelial-mesenchymal transition (EMT). In this process, epithelial cells undergo a transition to a mobile mesenchymal state, favoring invasion and metastasis. Therefore, this research analyzed the immunohistochemical expression of E-cadherin, Twist1, Snail1, α-SMA, vimentin (VM) and matrix metalloproteinase 9 (MMP-9) in 90 SGTs cases; correlations among the biomarkers, as well as between the biomarkers and clinicopathological parameters were made. We selected 20 cases of pleomorphic adenoma (PA), 20 cases of mucoepidermoid carcinoma (MEC), 20 cases of adenoid cystic carcinoma (ACC), 10 cases of polymorphous adenocarcinoma (PAC), 10 cases of epithelial-myoepithelial carcinoma (EMC) and 10 cases of carcinoma ex-pleomorphic adenoma (CXPA). E-cadherin, Twist1, and Snail1 were analyzed in tumor parenchyma, observing the percentage of positive cells (PP) using scores ranging from 0 to 4, and the expression intensity (EI), whose scores were ranged from 0 to 3. The evaluation of MMP-9 was performed in tumor parenchyma and stroma, also evaluating PP and IE, both based on scores that ranged from 0 to 3. The labeling for α-SMA and VM was analyzed in stromal cells. Positive cells for α-SMA were counted in 10 fields and the mean was calculated. VM was evaluated qualitatively, using 4 scores according to EI and whether the labeling was diffuse or focal. Obtained data were analyzed using Statistical Package for Social Science, GraphPad Prism, and STATA software. The significance level of 5% was adopted for the statistical tests. Patients were mostly female, with a mean age of 49.8 years; the major salivary glands were the most affected anatomical site, mainly the parotid gland. A lower E-cadherin immunostaining was verified in PAs in comparison to malignant neoplasms of salivary glands (MNSGs). Low immunoexpression of Twist1 and Snail1 was observed in PAs. Regarding the nuclear expression of Twist1, it was found greater expression in malignant neoplasms than in PAs. Furthermore, Twist1 in the nucleus was correlated with cytoplasmic expression of E-cadherin in MNSGs. Regarding clinicopathological parameters, this protein was statistically related to higher chances of death. Low immunoexpression of Snail1 was evidenced among the MNSGs. However, in the analysis of CACs, greater nuclear expression was observed in the solid variant compared to the others. Expression of MMP-9 in parenchyma showed a positive correlation with cytoplasmic Twist1 and Snail1nuclear in MNSGs. MMP-9 also showed a positive correlation when comparing its immunoexpression in the parenchyma and the stroma. VM was presented as a biomarker to be considered in the clinical evaluation of patients since it showed a significant correlation between greater tumor size and a higher frequency of death. Furthermore, the high expression of this protein appeared as an independent predictive factor for worse overall survival (OS) rates. The evaluation of the rest of the clinicopathological factors showed advanced clinical stages as an indicator of independent prognostic value for lower rates of OS. For disease-free survival, these indicators were the location in the minor salivary gland and the presence of distant metastasis. Our results suggest that the EMT may be related to myoepithelial differentiation in PAs and tumor progression in MNSGs. Also, Twist1 and MMP-9 appear to play a greater role in the scenario of EMT in MNSGs; finally, VM might be used as a prognostic value indicator (AU).

Definición, patogenia y factores de riesgo de la fibrosis pulmonar idiopática / Definition, pathogenesis and risk factors of idiopathic pulmonary fibrosis

La fibrosis pulmonar idiopática (FPI) es una forma específica de neumonía intersticial idiopática, de tipo fibrosante crónica y progresiva, con patrón radiológico y/o histológico de neumonía intersticial usual (NIU). Su patogenia es compleja, el modelo más aceptado actualmente es basado en las células epiteliales alveolares, aberrantemente activadas que conducen a la proliferación de fibroblastos y su diferenciación a miofibroblastos que depositan matriz extracelular y destruyen irreversiblemente la arquitectura pulmonar. No existe un claro factor inicial que explique la activación y posterior mantención del mecanismo de la fibrosis. El factor de crecimiento transformante beta (TGF-β) liberado por las células epiteliales alveolares se ha implicado como unos de los principales conductores de la inducción y proliferación de fibroblastos alterados que persiste mucho tiempo después de la estimulación inicial, lo que explicaría en gran parte el comportamiento clínico progresivo y crónico.

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a specific form of idiopathic interstitial pneumonia, of chronic and progressive fibrosing type, with radiological and / or histological pattern of usual interstitial pneumonia (UIP). Its pathogenesis is complex, the most accepted model currently is based on the fact that the alveolar epithelial cells, aberrantly activated, lead to the proliferation of fibroblasts and their differentiation to myofibroblasts that deposit extracellular matrix and irreversibly destroy the pulmonary architecture. There is no clear initial trigger that explains the activation and subsequent maintenance of the fibrosis mechanism. The transforming growth factor beta (TGF-β), released by the alveolar epithelial cells, has been implicated as one of the main drivers of the induction and proliferation of altered fibroblasts that persists long after the initial stimulation, which would largely explain progressive and chronic clinical behavior.

Contractura de Dupuytren. Estudio de 33 casos en Colombia / Dupuytren's contracture. Study of SS cases in Colombia

RESUMEN Objetivo: Describir el comportamiento clínico y epidemiológico de la contractura de Dupuytren (CD) en la población colombiana y comparar nuestros resultados con otras series publicadas en la literatura. Materiales y métodos: Estudio descriptivo observacional de 33 casos de CD presentados en el hospital San Pedro y San Pablo de la Virginia, Risaralda, durante los últimos 6 arios. Los pacientes cumplieron con el diagnóstico de CD de acuerdo con el parámetro establecido. Se compararon los resultados con diferentes series de casos de CD publicadas en la literatura. Resultados: La edad promedio al momento del diagnóstico fue de 61,3 años con mayor prevalencia en hombres (64% de los casos). La forma de presentación más frecuente fue unilateral en mano derecha (73%), a diferencia de lo reportado en otras series, donde el compromiso usualmente fue bilateral. La diabetes mellitus fue la comorbilidad con mayor asociación a la CD (24,24%), hallazgo similar a lo publicado previamente. La mayoría de los pacientes requirió tratamiento quirúrgico. Conclusiones: La CD es una entidad de mayor ocurrencia en hombres de la sexta a la séptima década de la vida. La diabetes mellitus es la enfermedad que más se asocia a su aparición, sin encontrase diferencias entre los estudios realizados. En población colombiana no hay relación aparente con epilepsia. La presentación de la CD es variable, encontrándose en nuestra serie un mayor compromiso unilateral a diferencia de otras poblaciones donde la presentación usualmente es bilateral.

ABSTRACT Objective: To describe the clinical and epidemiological behavior of Dupuytren's contracture (DC) in the Colombian population, and to compare the results of this study with other series published in the literature. Materials and methods: A descriptive, observational study of 33 cases of DC presented at the Hospital San Pedro y San Pablo, La Virginia Risaralda, over the last 6 years. The patients were diagnosed with DC according to the established parameter. The results were compared against different series of DC cases published in the literature. Results: The mean age at diagnosis was 61.3 years, with a higher prevalence of men (64% of cases). The most frequent form of presentation was unilateral in the right hand (73%), unlike the reports from other series with usually bilateral involvement. Diabetes mellitus was the comorbidity most often associated with DC (24.24%), a finding similar to those of previous publications. Most patients required surgical treatment. Conclusions: DC is a condition that occurs more often in men in the sixth or seventh decade of life. Diabetes mellitus is the most frequently associated disease, with no differences being found among the various studies. In the Colombian population there is no apparent association with epilepsy. The presentation of DC is variable, but our series showed more unilateral involvement as compared to other populations where the presentation is usually bilateral.

Diferenciação de miofibroblastos em feridas após uso tópico do metronidazol: estudo experimental / Differentiation of myofibroblasts in wounds after topical use of metronidazole: an experimental study

RESUMO Objetivo: avaliar os efeitos da administração tópica do metronidazol na diferenciação de fibroblastos e na contração da ferida durante cicatrização experimental por segunda intenção em ratos. Métodos: cento e oito animais foram submetidos a uma ferida circular no dorso, com 2cm de diâmetro e divididos em seis grupos: grupo controle, com aplicação de solução salina sobre a ferida e cinco grupos experimentais divididos de acordo com a concentração da solução do metronidazol utilizada (4%, 6%, 8%,10% e 12%). Curativos foram realizados diariamente durante todo o período do experimento, que foi subdividido em três momentos de análise: três, sete e 14 dias. A contração da ferida foi avaliada por planimetria digital e os miofibroblastos e protomiofibroblastos foram identificados usando técnicas de imuno-histoquímica CD34 e a-SMA. Resultados: a contração da ferida não apresentou diferença entre os grupos e o controle. Os protomiofibroblastos foram significativamente mais numerosos aos sete dias (p=0,022) nos grupos metronidazol de 4%, 6% e 8%. Após 14 dias, nos mesmos grupos, os miofibroblastos predominaram significativamente (p=0,01). Conclusão: a administração tópica de solução de metronidazol em feridas de pele com cicatrização por segunda intenção foi capaz de melhorar a diferenciação de fibroblastos. A fase de contração da cicatrização de feridas permaneceu inalterada, sem redução significativa da contração avaliada pela planimetria digital. Estes resultados podem ser utilizados em favor do processo de cicatrização de feridas.

ABSTRACT Objective: to assess the effects of topical administration of metronidazole on fibroblast differentiation and on wound contraction during experimental secondary intention wound healing in rats. Methods: we submitted 108 rats to a circular wound on the back, 2cm in diameter, and divided them into six groups: control group, with application of saline solution on the wound and five experimental groups, divided according to the concentration of metronidazole solution used (4%, 6%, 8%, 10% and 12%). We changed the dressings daily throughout the trial period, which comprised three stages of analysis: three, seven and 14 days. We evaluated wound contraction by digital planimetry, and identified myofibroblasts and protomyofibroblasts using CD34 and α-SMA immunohistochemistry techniques. Results: wound contraction was not different between the experimental and the control groups. Protomyofibroblasts were significantly more numerous at seven days (p=0.022) in the 4%, 6% and 8% metronidazole groups. After 14 days, in the same groups, myofibroblasts predominated significantly (p=0.01). Conclusion: the topical administration of metronidazole solution in skin wounds healing by secondary intention was able to improve the differentiation of fibroblasts. The contraction phase of wound healing remained unchanged, without significant reduction of the contraction evaluated by digital planimetry. These results can be used in favor of the wound healing process.

Estudo imunoistoquímico das proteínas CD34 e α-SMA em cistos radiculares e cistos radiculares residuais / Immunohistochemical study of CD34 and α-SMA proteins in radicular cysts and residual radicular cysts

Introdução: Os cistos radiculares são lesões inflamatórias provenientes de processos infecciosos da necrose da polpa. Os miofibroblastos (MFs) e a angiogênese são fatores importantes no desenvolvimento e progressão das lesões císticas, de modo que essas células secretam fatores de crescimento e proteases, assim como a angiogênese é importante para a produção de matriz e a migração celular, afetando o crescimento das periapicopatias. Objetivo: O presente trabalho consistiu em analisar, por meio da imunoistoquímica, as expressões do CD34 e αSMA em cistos radiculares (CRs) e cistos radiculares residuais (CRRs), com o propósito de contribuir para um maior entendimento a respeito da expansão e progressão das lesões periapicais. Materiais e Métodos: Foram realizadas análises clínicas, morfológicas e imunoistoquímicas em 30 CRs e 30 CRRs. A presente pesquisa constituiu em uma análise descritiva e quantitativa das expressões imunoistoquímicas positivas do CD34 e α-SMA nos espécimes. A expressão do αSMA foi avaliada na cápsula fibrosa das lesões em 10 campos, inicialmente a um aumento de (100x), posteriormente em (400x) e uma média final foi estabelecida, entretanto, para o índice angiogênico foi realizada a contagem de microvasos imunomarcados pelo anticorpo anti-CD34 em 10 campos de (200x). A análise estatística foi realizada através dos testes de Mann-Whitney, Qui-quadrado de Pearson e Correlação de Spearman, o nível de significância estabelecido foi p<0,05. Resultados: Os resultados demonstraram diferenças estatisticamente significativas referentes ao α-SMA e α-SMA versus CD34, todavia, com relação a imunomarcação do CD34 não revelou diferença estatística entre as lesões. Conclusão: Diante dos resultados obtidos consideramos que a correlação significativa entre a presença de miofibroblastos e o índice angiogênico entre as lesões estudadas estão relacionadas com o reparo das periapicopatias (AU).

Introduction: Radicular cysts are inflammatory lesions resulting from infectious processes of pulp necrosis. Myofibroblasts (MFs) and angiogenesis are important factors in the development and progression of cystic lesions, so that MFs secrete growth factors and proteases, as well as angiogenesis stimulates matrix deposition and cell migration, affecting the growth of periapicopathies. Objective: This study aims to evaluate the immunohistochemical expression of CD34 and α-SMA in radicular cysts (CRs) and residual radicular cysts (CRRs), in order to contribute a better understanding of expansion and progression of periapical lesions. Materials and Methods: Clinical, morphological and immunohistochemical analyzes were performed on 30 CRs and 30 CRRs. The present study constitutes a descriptive, quantitative and comparative analysis of CD34 and α-SMA positive immunohistochemical expression in the specimens. Expression of α-SMA was evaluated in the fibrous capsule, at 100x magnification 10 fields of higher immunolabeling were selected below epithelial lining, thereafter at 400X magnification, the positive cells were quantified and at the end were calculated the averages of positive cells per field. However, angiogenic index was performed by counting microvessels immunolabelled by anti-CD34 antibody in 10 (200x) fields. Statistical analysis was performed using the Mann-Whitney, Pearson's Chi-square test and Spearman's correlation, with significance level set (p <0.05). Results: The results showed that there were statistically significant differences regarding α-SMA and α-SMAxCD34, however with respect to the CD34 immunostaining, there were no statistical differences between the lesions. Conclusion: Myofibroblasts and angiogenic index among studied lesions presented a significant correlation. Thus, they are believed contribute to the repair of the periapicopathies (AU).

[Inflammatory myofibroblastic tumor of the breast: A rare entity]. / Tumor miofibroblástico inflamatorio de mama: una entidad poco frecuente.

Also known as inflammatory pseudotumor, inflammatory myofibroblastic tumor is now considered a true low-grade neoplasm. Although the lung is the most common site, it has been described in many other locations, including the breast; the first report of breast involvement was by Pettinato et al. in 1988. We report the case of a 52-year-old perimenopausal woman presenting with a slow-growing mass in her right breast. Mammography revealed a well demarcated lesion which was hypoechoic on ultrasound. A needle biopsy was performed yielding an initial diagnosis of myofibroma and the mass was resected. Histopathology of the 5-cm tumor revealed a fusocellular proliferation with a striking presence of inflammatory cells, morphologically and immunohistochemically concordant with inflammatory myofibroblastic tumor. The patient underwent further surgery to ensure free margins and after a negative extension study (PET-CT) is receiving no further therapy. To date, she has shown no signs of recurrence 8 months postoperatively. Inflammatory myofibroblastic tumor of the breast is very infrequent, with less than 30 reported cases. Differential diagnosis with both benign and malignant entities is extensive and it may precede or coexist with carcinoma of the adjacent breast. Although it is considered a low-malignant potential lesion, there are well documented cases of recurrence and even metastasis. Surgical resection with wide margins is the primary treatment and no systemic therapy is indicated; however, clinical follow-up is mandatory as there are no well-established criteria as yet to predict the biological behavior of this tumor.

Tumor miofibroblástico: una entidad rara, a una edad de presentación neonatal aún más rara. Presentación de caso / Myofibroblastic tumor: a rare entity and even more rare age of presentation. A case report

Se expone el caso de un neonato, a quien durante el examen físico se le palpa una masa en el hipocondrio izquierdo. Le realizan ecografía abdominal con hallazgo de una masa de probable origen suprarrenal; la resonancia magnética (RM) muestra una masa dependiente del mesenterio. En cirugía se observa importante adhesión a los órganos vecinos, se le realiza biopsia con resultado de tumor miofibroblástico. Este tumor hace parte del grupo heterogéneo de lesiones formadoras de masa llamado pseudotumor inflamatorio, el cual se define como una neoplasia fibroblástica/ miofibroblástica, con potencial biológico intermedio, de mayor ocurrencia en niños. Dada la baja frecuencia de aparición en edad neonatal, se realiza una revisión de la literatura acerca de su etiología, diagnóstico y tratamiento.

We present the case of a neonate, who upon physical examination a mass is palpated in the left hypochondrium, Abdominal ultrasound is performed with finding of a mass of probable adrenal origin; magnetic resonance imaging (MRI) shows a mass dependent on the mesentery. In surgery, important adhesion to neighboring organs is observed; biopsy is performed with the result of myofibroblastic tumor. This tumor is part of the heterogeneous group of mass-forming lesions called inflammatory pseudotumor, which is defined as a fibroblastic/myofibroblastic neoplasm, with intermediate biological potential, of greater occurrence in children. Given the low frequency of appearance in neonatal age, a review of the literature about its aetiology, diagnosis and treatment is carried out.

Identificação dos colágenos I, III, IV e α-SMA e participação dos miofibroblastos no processo fibrótico das endometroses equinas / Identification of collagens types I, III, IV and α-SMA and the participation of myofibroblasts in the fibrotic process in equine endometrosis

A endometrose é uma alteração degenerativa das glândulas uterinas e do estroma circundante, caracterizada pelo arranjo periglandular de miofibroblastos e pela deposição de matriz extracelular (ECM). O presente trabalho objetivou avaliar a expressão de colágenos tipos I, III e IV e α-actina de músculo liso (α-SMA) nas endometroses equinas, procurando esclarecer a participação dos miofibroblastos na progressão desses processos. Foram utilizadas 24 biópsias uterinas com diagnóstico de endometrose, recebidas pelo Serviço de Patologia Veterinária e de Reprodução Animal da FMVZ, Unesp, Botucatu, SP. Cortes histológicos foram submetidos às técnicas histoquímicas de tricrômico de Masson, picrosirius red sob luz polarizada e ácido periódico de Schiff (PAS) e imuno-histoquímicas para os três tipos de colágeno citados e α-SMA. Ainda, traçou-se um paralelo entre a técnica de picrosirius red e a imunomarcação dos colágenos tipos I e III. A análise histológica revelou que as fibras de colágeno denso correspondem ao colágeno tipo I, predominantes nas endometroses inativa e inativa destrutiva. As fibras de colágeno frouxo correspondem ao colágeno tipo III, predominantes nas endometroses ativas e ativas destrutivas. Nesses mesmos processos, a membrana basal revelou espessamento, aparentemente não relacionado ao colágeno tipo IV, e uma maior imunomarcação de miofibroblastos periglandulares em relação às endometroses inativa e inativa destrutiva. Dessa forma, nota-se que os miofibroblastos estão relacionados ao aumento na deposição de colágeno tipo III nos ninhos fibróticos ativos.(AU)

Endometriosis is a degenerative change of the uterine glands and surrounding stroma, characterized by periglandular arrangement of myofibroblasts and deposition of extracellular matrix (ECM). The aim of this study was to evaluate the expression of collagen type I, III and IV and α-smooth muscle actin (α-SMA) in equine endometriosis, and investigate the role of myofibroblasts in the progression of these processes. A parallel was made with histochemical techniques of Masson's trichrome, Picrosirius Red under polarized light and Periodic Acid-Schiff (PAS). Twenty four uterine biopsies received by the Veterinary Pathology Service and Animal Reproduction of FMVZ, UNESP, Botucatu, SP, were diagnosed with endometriosis. Histological analysis revealed that the orange dense collagen fibers correspond to type I collagen, being prevalent in inactive and inactive destructive endometriosis. The green loose collagen fibers correspond to type III collagen, and are predominant in active and active destructive endometriosis. In the same processes, a greater amount of periglandular myofibroblasts were observed in comparison to inactive and inactive destructive endometriosis. The presence of these cells in active processes are strongly related to an increased deposition of collagen type III in fibrotic nests. Regarding the basement membrane, the active destructive and active endometriosis shows thickening, apparently not related to an increase in expression of type IV collagen. The active destructive and inactive destructive endometriosis exhibited disruption areas in type IV collagen fibers. Thus, it is noted that the myofibroblasts are related to increased deposition of type III collagen in active fibrotic nests.(AU)

Avaliação dos efeitos do subgalato de bismuto na proliferação de miofibroblastos / Assessment of the effects of bismuth subgallate on proliferation of myofibroblasts: an experimental study in rats

Resumo Contexto O subgalato de bismuto é um metal pesado e insolúvel, utilizado por suas propriedades adstringentes e hemostáticas. Objetivo Avaliar os efeitos do subgalato de bismuto na cicatrização mediante observação de miofibroblastos em pele de ratos. Métodos Foram utilizados 60 ratos da linhagem Wistar, que receberam uma ferida no dorso da pele. Os animais foram divididos em dois grupos: controle (aplicação diária de cloreto de sódio a 0,9%) e experimental (aplicação diária de 0,5 mg de subgalato de bismuto). Cada grupo foi subdividido em três subgrupos, que foram reoperados para retirada da ferida em 3, 7 e 14 dias. Foi realizada coloração de hematoxilina eosina, picrosirius e imuno-histoquímica para avaliar contagem de miofibroblastos, resposta inflamatória e síntese de colágeno. Resultados Não foi encontrada diferença entre os grupos controle e experimento com relação ao processo inflamatório – subgrupos 3 dias (p = 1), 7 dias (p = 0,474) e 14 dias (p = 303). A avaliação dos colágenos tipo I e III no grupo-controle não demonstrou benefícios de cicatrização – 3 dias (p = 0,436), 7 dias (p = 0,853) e 14 dias (p = 0,436); já no grupo experimental, houve aumento dos colágenos tipos I e III nos subgrupos 3 e 14 dias (p = 0,005). A imuno-histoquímica confirmou os resultados encontrados na coloração hematoxilina eosina, na qual a área de miofibroblastos entre os subgrupos, nos grupos experimental (p = 0,4) e controle (p = 0,336), foi indiferente. Conclusão A utilização do subgalato de bismuto em ferida de pele de ratos não evidenciou benefícios na cicatrização, ou seja, não houve diferença na fibroplasia quando comparados os grupos experimental e controle.

Abstract Background Bismuth subgallate is an insoluble heavy metal that is used for its astringent and hemostatic properties. Objective To evaluate the effects of bismuth subgallate on the healing process by observation of myofibroblasts in the skin of rats. Methods A sample of 60 Wistar rats was used. Each rat was subjected to a dorsal skin wound and allocated to one of two groups: a control group, in which 0.9% sodium chloride was administered daily, or an experimental group, in which 0.5 mg of bismuth subgallate was administered daily. Each of these groups was further subdivided into three subsets, which were reoperated after 3, 7 and 14 days respectively for excision and collection of the skin wound specimens. Samples were treated with hematoxylin eosin, picrosirius, and immunohistochemical staining to enable assessment of myofibroblast counts, inflammatory response phase, and collagen synthesis. Results No inflammatory process differences were detected between the control and experimental groups at 3 days (p = 1), 7 days (p = 0.474), or 14 days (p = 303). Evaluation of types I and III collagen in the control group did not demonstrate healing benefits at 3 days (p = 0.436), 7 days (p = 0.853), or 14 days (p = 0.436); whereas in the experimental group there were increases in types I and III collagen at 3 and 14 days (p = 0.005). Immunohistochemical analysis confirmed the results of hematoxylin eosin staining, since there were no differences between subsets in terms of area of myofibroblasts, in the experimental (p = 0.4) or the control (p = 0.336) groups. Conclusions Administration of bismuth subgallate to skin wounds in rats did not result in any evidence of benefits to healing, i.e., no difference in fibroplasia was detected when experimental and control groups were compared.

Tumor de Reye: comunicación de un caso tratado con corticoide tópico de mediana potencia / Reye tumor: report of a case treated with a medium power corticosteroid

La fibromatosis digital infantil o fibroma por cuerpos de inclusión, es una entidad de rara incidencia, que se caracteriza por una proliferación benigna de células miofibroblásticas, que forman nódulos en el dorso de los dedos de manos o pies en los niños. Tiene una imagen histológica muy característica y una tendencia a la recurrencia; algunos pueden involucionar espontáneamente sin tratamiento. Se presenta el caso de un niño de siete meses de edad, que desde el nacimiento presentó tumoraciones nodulares en la punta de los dedos; la histología mostró una proliferación de haces entrelazados de células fusiformes con núcleos vesiculosos, en cuyo citoplasma presentaba cuerpos de inclusión eosinofílicos, teñidos con la coloración tricrómica de Masson.

Infantile digital fibromatosis or inclusion body fibromatosis is a rare entity, which is characterized by a benign proliferation of myofibroblast cells that form nodules on the back of the fingers or feet of children. It has a distinctive histological picture and a tendency to recur; some may regress spontaneously without treatment. I present the case of a 7-month-old, that from birth has a small nodular tumors on the tips of his fingers; histology showed a proliferation of beams intertwined spindle cells with vesicular nuclei, in which cytoplasm showed eosinophilic inclusion bodies stained with Masson trichrome staining.

Aplicação da mitomicina C na cirurgia refrativa / Mitomycin C application in refractive surgery

RESUMO A mitomicina C teve seu uso profilático e terapêutico estabelecido, ao longo dos anos, para diminuir o haze depois da ablação superficial. A mitomicina C é segura e eficaz como uma terapia adjuvante aplicada após um procedimento primário de ceratectomia fotorrefrativa ou após um retratamento com ceratectomia fotorrefrativa após o laser in situ keratomileusis LASIK. A mitomicina age modulando a cicatrização após a cirurgia. Constitui-se num potente inibidor de mitose, bloqueia a ativação e a profliferação dos fibroblastos e a diferenciação dos miofibroblastos. Embora existam muitos estudos apontando a segurança da mitomicina nas doses ultilizadas, ainda persistem dúvidas quanto à segurança, a longo prazo, do uso da mitomicina. Quando as córneas são examinadas com microscópios confocal, após depleção inicial dos ceratócitos, a densidade celular parece retornar ao normal seis a 12 meses após o uso de mitomicina C . A maioria dos estudos clínicos não encontrou diferença significativa entre a densidade endotelial celular préoperatória e pós-operatória quando a mitomicina C 0.02% foi aplicada durante a cirurgia com um tempo de exposição de 2 minutos ou menos. Em aproximadamente 14 anos, a mitomicina C mostrou-se eficaz na prevenção e tratamento do haze corneano.

ABSTRACT Over the years, mitomycin C has been used by refractive surgeons to prophylactically decrease haze after surface ablation procedures and therapeutically in the treatment of preexisting haze. Development of mitomycin C treatments has had a significant role in the revival of surface ablation techniques. We reviewed the literature regarding mechanism of action of mitomycin C, its role in modulating wound healing after refractive surgery, and its safety and efficacy as adjuvant therapy applied after primary photorefractive keratectomy surgery or after photorefractive keratectomy re-treatment after laser in situ keratomileusis and other corneal surgeries and disorders. The drug is a potent mitotic inhibitor that effectively blocks keratocyte activation, proliferation, and myofibroblast differentiation. Many studies have suggested that mitomycin C is safe and effective in doses used by anterior surface surgeons, although there continue to be concerns regarding long-term safety. After initial depletion of anterior keratocytes, keratocyte density seems to return to normal 6 to12 months after the use of mitomycin C when corneas are examined with the confocal microscope. Most clinical studies found no difference between preoperative and postoperative corneal endothelial cell densities when mitomycin C 0.02% was applied during refractive surgery,with exposure time of 2 minutes or less. After approximately 14 years of use, mitomycin C has been found to be effective when used for prevention and treatment of corneal haze.

Miofibroblastos e sua relação com o carcinoma de células escamosas oral / Myofibroblasts and their relationship with oral squamous cell carcinoma

Os miofibroblastos são células especializadas que exibem um fenótipo híbrido, com características de fibroblastos e células musculares lisas. Devido sua habilidade contrátil e capacidade de síntese de componentes da matriz extracelular, citocinas, proteases e fatores pró-angiogênicos, os miofibroblastos têm sido implicados na patogênese de doenças fibrocontráteis e na progressão de diversos tumores, incluindo o carcinoma de células escamosas (CCE) oral. OBJETIVO: Fazer uma revisão da literatura sobre a origem dos miofibroblastos, seus principais aspectos morfofisiológicos e imuno-histoquímicos, assim como discutir sua relação com o CCE oral. MÉTODO: Realizou-se uma busca eletrônica na base de dados PubMed, selecionando os principais artigos da literatura em língua inglesa relacionados ao tema, publicados entre janeiro de 1991 e dezembro de 2011. CONCLUSÃO: Os miofibroblastos representam um componente importante do estroma de CCE orais, embora não estejam presentes em todos os casos desta neoplasia. A presença abundante destas células pode estar associada com a recorrência local da doença e diminuição da sobrevida dos pacientes. No entanto, em virtude do número relativamente limitado de estudos sobre o assunto, pesquisas ainda são necessárias para esclarecer os mecanismos moleculares pelos quais os miofibroblastos são capazes de influenciar no comportamento biológico do CCE oral.

Myofibroblasts are hybrid-phenotype differentiated cells in between fibroblasts and smooth muscle cells. Due to their contractile features and ability to synthesize extracellular matrix components, cytokines, proteases, and proangiogenic factors, myofibroblasts have been implicated in the pathogenesis of fibrocontractive diseases and in the progression of many tumors, including oral squamous cell carcinoma (SCC). OBJECTIVE: To perform a literature review on the origin of myofibroblasts, their main morpho-physiological and immunohistochemical aspects, and to discuss the correlations with oral SCC. METHOD: A search was made on the PubMed database to select the main papers in the literature in English related to the subject, published between January 1991 and December 2011. CONCLUSION: Myofibroblasts are an important component of the stroma of oral SCCs, although they are not present in all tumors. Abundant presence of myofibroblasts may be associated with local disease recurrence and decreased patient survival. However, given the relatively limited number of studies on the subject, further research is needed to clarify the molecular mechanisms by which myofibroblasts influence the biological behavior of oral SCC.

Efeito radioprotetor da L-Glutamina na parede da bexiga de ratos submetidos à irradiação pélvica / Protective effects of L-Glutamine on the bladder wall of rats submitted to pelvic radiation

A radioterapia é frequentemente utilizada no tratamento de tumores da próstata, porém durante esse procedimento a bexiga sadia usualmente sofre efeitos colaterais. Através do uso de um modelo animal para irradiação pélvica, avaliamos se a suplementação nutricional com L-glutamina poderia prevenir possíveis danos na parede da bexiga, especialmente em suas camadas mais superficiais. Ratos Wistar adultos machos com idade entre 3 e 4 meses foram separados em grupos de 8 animais: grupo controle que não recebeu a irradiação; grupos somente irradiados que foram mortos 7 (R7) e 15 dias (R15) após a irradiação (dose única de 10 Gy na região pélvico-abdominal); grupos irradiados e suplementados com L-glutamina (0,65g/kg de peso por dia), que foram mortos 7 (RG7) ou 15 após a irradiação. Células e vasos sanguíneos da lâmina própria, bem como o urotélio, foram avaliados com métodos histológicos. No urotélio foram feitas análises da altura e densidade nuclear e na lâmina própria densidade celular, densidade vascular e o número de mastócitos. Os resultados mostraram que em R7, a altura e densidade nuclear do urotélio e a densidade celular da lâmina própria não foram alterados significativamente. Entretanto a densidade dos vasos sanguíneos foi reduzida em 48% (p<0,05) e essa alteração foi evitada pela glutamina (p <0,02). No grupo R15, a densidade celular do epitélio aumentou em 35% (p<0,02). A densidade celular da lâmina própria não apresentou diferença estatística entre os grupos. Os mastócitos na lâmina própria foram reduzidos em R7 e R15. Apesar de ainda reduzidos em RG7 em RG15 houve aumento no número desse tipo celular o que sugere uma ação positiva da glutamina. Células α-actina positivas na lâmina própria formam uma camada suburotelial e foram identificadas como miofibroblastos. A espessura dessa camada aumentou em R7, mas foi semelhante ao controle em RG7, enquanto alterações em R15 e RG15 foram menos evidentes. Esses resultados mostraram que a utilização ...

Radiotherapy is often used to treat prostate tumors, but the normal bladder is usually adversely affected. Using an animal model of pelvic radiation, we investigated whether glutamine nutritional supplementation can prevent radiation-induced damage to the bladder, especially in its more superficial layers. Male rats aged 3 to 4 months were divided into groups of 8 animals each: controls, which consisted intact animals; radiated-only rats, which were sacrificed 7 (R7) or 15 (R15) days after a radiation session (10 Gy aimed at the pelvico-abdominal region); and radiated rats receiving L-glutamine supplementation (0.65 g/kg body weight/day), which were sacrificed 7 (RG7) or 15 (RG15) days after the radiation session. Morphological and morphometric analysis of the urothelium were made. Nuclear density, lamina propria cell density and mast cells numbers per area were counted. The results showed that, in R7, epithelial thickness, epithelial cell density, and cell density in the lamina propria were not significantly affected. However, density of blood vessels in R7 was reduced by 48% (p < 0.05) and this alteration was mostly prevented by glutamine (p < 0.02). In R15, density of blood vessels in the lamina propria was not significantly modified. However, epithelial thickness was reduced by 25% (p < 0.05) in R15, and this effect was prevented by glutamine (p < 0.01). In R15, epithelial cell density was increased by 35% (p < 0.02), but glutamine did not protect against this radiation-induced increase. Cell density in the lamina propria was likewise unaffected in R15. Density of mast cells in the lamina propria was markedly reduced in R7 and R15. The density was still reduced in RG7, but a higher density in RG15 suggested a glutamine-mediated recovery. Alpha-actin positive cells in the lamina propria formed a suburothelial layer and were identified as myofibroblasts. Thickness of this layer was increased in R7, but was similar to controls in RG7, while changes in R15 ...

Evaluation of myofibroblasts and its association with TGF-β and IFN-γ in lesions of patients with american tegumentary leishmaniasis / Avaliação de miofibroblastos e sua associação com TGF-β e IFN-γ em lesões de pacientes com leishmaniose tegumentar americana

BACKGROUND: Leishmaniasis is caused by protozoa of Leishmania spp. genus. It is transmitted by the bite of the sand fly insect. It is believed that 12 million people are infected with this disease and that its annual incidence is 2 million; this number is increasing. OBJECTIVES: The present study aimed to evaluate the expression of myofibroblasts through alpha smooth muscle actin labeling, and to analyze their relationship with the expression of the cytokines Interferon gama (IFN-γ) and Transforming growth factor beta (TGF-β1) in lesions of American tegumentary leishmaniasis (ATL). METHODS: For this retrospective study, we gathered 28 patients diagnosed with ATL between 2002 and 2006. We verified α-SMA positivity and performed IFN-γ and TGF-β1 immunolabeling to identify the profile of these cytokines in both positive and negative cases for myofibroblasts, via immunohistochemistry, in order to assess the presence of myofibroblasts,. RESULTS: We observed that out of the 28 cases, 17 (60.71%) were positive for alpha smooth muscle actin, while 11 (39.29%) were negative, and IFN-γ was more expressed than TGF-β1 (p=0.007). The mean percentages of expression of IFN-γ and TGF-β1 in the group negative for alpha smooth muscle actin were different, with an increased expression of IFN-γ (p=0.047). However, in the group positive for alpha smooth muscle actin, there was no difference in cytokine labeling (p>0.05). CONCLUSION: We verified the presence of positive α-SMA stromal cells in the majority of the cases of ATL, indicating the presence of myofibroblasts. In cases negative for alpha smooth muscle actin, an increased expression of IFN-γ compared to TGF-β1 was observed, revealing an inflammatory phase progressing to a healing process.

FUNDAMENTOS: A leishmaniose é causada pelo protozoário do gênero Leishmania spp., sendo transmitida via picada do inseto flebotomíneo. Estima-se que 12 milhões de indivíduos estejam infectados com a doença, sendo a incidência anual de 2 milhões, número este que tende a aumentar. OBJETIVOS: Avaliar a expressão de miofibroblastos através da imunomarcação de actina de músculo liso alfa, e analisar sua relação com a expressão de citocinas IFN-γ e TGF-β1 nas lesões de pacientes com leishmaniose tegumentar americana. MÉTODOS: Trata-se de um estudo retrospectivo, em que foram avaliados 28 pacientes diagnosticados com leishmaniose tegumentar americana durante o período de 2002 a 2006. Na técnica de imuno-histoquímica avaliou-se a presença de miofibroblastos, através do marcador actina de músculo liso alfa, além da imunomarcação do IFN-γ e TGF-β1 para identificar o perfil dessas citocinas nos casos positivos e negativos para miofibroblastos. RESULTADOS: Observou-se que dos 28 casos, 17 (60,71%) foram positivos para actina de músculo liso alfa, enquanto 11 (39,29%) foram negativos. IFN-γ teve uma maior expressão do que TGF-β1 (p=0,007). A porcentagem média de expressão de IFN-γ e TGF-β1 no grupo negativo para actina de músculo liso alfa foi diferente, apresentando uma maior expressão de IFN-γ (p=0.047). Entretanto, o grupo positivo para actina de músculo liso alfa não apresentou uma diferença estatisticamente significativa (p>0,05). CONCLUSÃO: Verificou-se uma expressão de actina de músculo liso alfa nos casos de leishmaniose tegumentar americana, indicando a presença de miofibroblastos. Nos casos negativos para actina de músculo liso alfa, observou-se uma maior expressão de IFN-γ comparando com TGF-β1, revelando que a fase inflamatória está envolvida no processo de cicatrização da lesão.

Análise de miofibroblastos no estroma de carcinoma epidermoide da boca / Analysis myofibroblasts in the stroma of squamous cell carcinoma of mouth

O estroma tumoral sofre modificações durante a progressão de neoplasia maligna. As alterações da matriz extracelular e a presença de miofibroblastos parecem influenciar nos processos de invasão e metástase que caracterizam os tumores malignos orais. Objetivou-se, com a pesquisa, investigar a presença de miofibroblastos na frente de invasão neoplásica do carcinoma epidermoide de boca, por meio da microscopia eletrônica de transmissão e marcadores imunoistoquímicos. Neste estudo, 23 casos de carcinomas epidermoides de diversas localizações da boca foram classificados segundo um sistema de graduação histológica. Foram utilizadas as colorações pela hematoxilina-eosina (HE) e as expressões imunoistoquímicas da vimentina, da actina alfa de músculo liso e da desmina foram analisadas em lesões com diferentes escores histológicos de malignidade. A microscopia eletrônica de transmissão foi utilizada a fim de confirmar a presença de células do tipo miofibroblastos no estroma tumoral. A expressão da vimentina apresentou diferentes padrões nos carcinomas epidermoides da cavidade oral com altos e baixos escores de malignidade. A actina alfa de músculo liso esteve presente em alguns casos estudados. Embora a actina alfa de músculo liso tenha sugerido a presença de miofibroblastos no estroma dos carcinomas epidermoides da cavidade oral, a análise ultraestrutural não confirmou este resultado.

The tumor stroma undergoes changes during the progression of malignant neoplasia. Changes in the extracellular matrix and the presence of myofibroblasts appear to influence the processes of invasion and metastasis of malignant tumors that characterize the oral. The objective was to investigate the presence of myofibroblasts in front of invasion in squamous cell carcinoma of mouth, through transmission electron microscopy and immunohistochemical markers. In this study, 23 cases of squamous cell carcinoma of the mouth from various locations were classified according to a histological grading system. Were used by hematoxylin-eosin (HE) staining and immunohistochemical expression of vimentin, the alpha smooth muscle actin and desmin were analyzed in lesions with different histological scores of malignancy. The transmission electron microscopy was used to confirm the presence of cell-type myofibroblasts in tumor stroma. The expression of vimentin showed different patterns of squamous cell carcinoma of the oral cavity with high and low scores of malignancy. The alpha-smooth muscle actin was present in some cases. Although the alpha smooth muscle actin has suggested the presence of myofibroblasts in the stroma of squamous cell carcinoma of the oral cavity, ultrastructural analysis did not confirm this result.

Distribution of Hepatic Myofibroblasts and Type I and III Collagen in Rat Liver Cirrhosis Induced by Thioacetamide / Distribución de Miofibroblastos y Colágeno Tipo I y III en Hígado de Ratas con Cirrosis Inducida por Tioacetamida

Thioacetamide (TAA) can induce various types of cirrhosis in the rat, including bridging fibrosis, biliary fibrosis, perisinusoidal/pericellular fibrosis and centrilobular fibrosis, in which different populations of hepatic myofibroblasts (MFs) are involved. The hepatic MFs can be classified into 3 groups: (a) portal/septal MFs; (b) activated hepatic stellate cell myofibroblasts (HSC/MFs); and (c) interface myofibroblasts (IF/MFs). The present study was carried out to examine the morphology and localization of hepatic MFs in relation to the distribution of type I and III collagen in rat cirrhotic livers. Immunohistochemistry to a-smooth muscle actin was employed to demonstrate the morphology and localization of the subpopulations of hepatic MFs. The distribution of type I and III collagen was investigated by using specific antibodies. Portal and septal MFs were windmill in shape and localized around tributaries of the portal and hepatic veins where type I and III collagen was accumulated. HSC/MFs with arachnoid in shape were localized in the spaces of Disse and spaces between neighboring hepatocytes where type I collagen was formed. IF/MFs showed arachnoid shapes and distributed along the margin of fibrous septa where type I collagen was condensed. MFs with polygonal shapes were also found around the wall of hepatic sinusoids, margin of fibrous septa and around the portal tract. They were probably transitional cells to the mature MFs. Our data suggest that each subpopulation of hepatic MFs shows characteristic morphology and localization, which correlates with localization of type I and/or type III collagen.

La tioacetamida (TAA) puede provocar diversos tipos de cirrosis hepática en la rata, incluyendo fibrosis en puente, fibrosis biliar, fibrosis perisinusoidal/pericelular y fibrosis centrolobulillar, en los que diferentes poblaciones de miofibroblastos hepáticos (MFs) están involucrados. Los MFs hepáticos se pueden clasificar en tres grupos: (a) MFs portal/ septal; (b) células estrelladas hepática activada miofibroblásticas (HSC/MFs), y (c) miofibroblastos de interface (IF/MFs). El presente estudio se realizó para examinar la morfología y localización de los MFs hepáticos en relación con la distribución de colágeno Tipos I y III en el hígado de ratas cirróticas. Se utilizó inmunohistoquímica de a-actina de músculo liso para demostrar la morfología y localización de las subpoblaciones de MFs hepática. La distribución de colágenos Tipos I y III se investigó utilizando anticuerpos específicos. FMs portales y septales mostraron forma de molino de viento y se localizaron cerca de afluentes de las venas porta y hepática donde los colágenos Tipos I y III se acumularon. HSC/MFs con forma aracnoide se localizaron en los espacios de Disse y los espacios entre hepatocitos vecinos, donde se formó el colágeno Tipo I. IF/MFs mostraron formas aracnoides y se distribuyeron a lo largo del margen de los septos fibrosos donde se condensó el colágeno Tipo I . MFs con formas poligonales también fueron encontrados alrededor de la pared de los sinusoides hepáticos, en el margen de los septos fibrosos y en todo el tracto portal. Probablemente fueron células de transición a los MFs maduros. Nuestros datos sugieren que cada subpoblación de MFs hepáticos muestra una morfología y localización característica, que se correlaciona con la localización de colágenos Tipo I y o III.

Efeitos dos receptores adrenérgicos no reparo tecidual cutâneo / Effects of adrenergic receptors in cutaneous tissue repair

Os receptores adrenérgicos regulam diversas funções do sistema tegumentar; entretanto, o papel destes receptores no processo de reparo tecidual cutâneo ainda não é completamente compreendido. O objetivo deste trabalho foi investigar o papel dos receptores alfa- e beta-adrenérgicos no reparo tecidual cutâneo em ratos. Inicialmente observamos que o bloqueio dos receptores beta1- e beta2-adrenérgicos (através da administração de propranolol) reduz a contração, a re-epitelização e a deposição de colágeno em lesões excisionais cutâneas, mas aumenta o infiltrado inflamatório, a proliferação celular, a densidade miofibroblástica e de vasos sanguíneos. Em seguida avaliamos se ambos receptores beta1- e beta2-adrenérgicos participam das alterações causadas pela administração de propranolol no reparo de lesões excisionais cutâneas e se os receptores alfa1- e alfa2-adrenérgicos participam do reparo destas lesões. O bloqueio de ambos receptores beta1- e beta1-adrenérgicos retarda a resposta inflamatória, o desenvolvimento do tecido de granulação e o remodelamento do tecido. Entretanto, o bloqueio do receptor beta1-adrenérgico não altera a re-epitelização. Além disso, o bloqueio dos receptores alfa1- e alfa2-adrenérgicos não compromete o reparo de lesões excisionais cutâneas. Posteriormente investigamos se o retardo induzido pela administração de propranolol no reparo tecidual cutâneo ocorre através da ativação dos receptores alfa-adrenérgicos. O bloqueio simultâneo dos receptores beta1-, beta2-, alfa1- e alfa2-adrenérgicos prejudica o fechamento, a re-epitelização, a mobilização de mastócitos e a proliferação celular de lesões excisionais cutâneas sem um efeito sinérgico ou a ativação dos receptores a-adrenérgicos. Além disso, estudamos os efeitos dos receptores alfa- e beta-adrenérgicos na formação do tecido de granulação em implantes de esponjas de poliuretano. O bloqueio dos receptores beta1- e beta2-adrenérgicos, mas não o bloqueio dos receptores alfa1 e alfa2...

Adrenoceptors regulate several functions of the skin; however, the role of adrenoceptors on cutaneous wound healing is not completely understood yet. The aim of this study was to investigate the role of the alfa- and beta-adrenoceptors on cutaneous wound healing in rats. Firstly, we observe that the blockage of beta1- and beta2-adrenoceptors (through propranolol administration) reduces wound contraction, re-epithelialization, and collagen deposition, but increases inflammatory infiltrate, cellular proliferation, density of myofibroblasts and blood vessels. Subsequently, we evaluate if both beta1- and beta2-adrenoceptors play a role in the propranolol-induced alterations on cutaneous wound healing and if alfa1- and alfa2-adrenoceptors participate in cutaneous wound healing. The blockade of both beta1- e beta2-adrenoceptors delays inflammatory response, granulation tissue formation and tissue remodeling. However, the blockade of beta1-adrenoceptors does not alter re-epithelialization. Moreover, the blockage of the alfa1- and alfa2-adrenoceptors does not compromise tissue repair of the cutaneous excisional lesions. Furthermore, we evaluate if propranolol-induced alterations on cutaneous wound healing occur through alfa1- and alfa2-adrenoceptors activation. The simultaneous blockade of beta1-, beta2-, alfa1- and alfa2-adrenoceptors impairs wound contraction, re-epithelialization, mast cells mobilization, and cellular proliferation of the cutaneous excisional lesions without a synergic effect or alfa-adrenoceptors activation. In addition, we study the effects of alfa- and beta-adrenoceptors blockade on granulation tissue formation in polyurethane sponges implants. The blockade of beta1- and beta2-adrenoceptors, but not alfa1- and alfa2-adrenoceptors, delays inflammatory cells migration, myofibroblastic differentiation, angiogenesis, and collagen fibers organization. Moreover, we also evaluate the effects of administration of a low dose of propranolol ...

Imunofenotipagem de lesões obtidas em carcinogênese quimicamente induzida por DMBA em glândulas salivares submandibulares e ratos (Rattus norvegicus) / Immunophenotyping of the lesions after DMBA chemical carcinogenesis in rat’s (Rattus norvegicus) submandibular salivary gland

A carcinogênese química em glândulas salivares animais não se apresenta como um modelo novo de pesquisa. O uso de DMBA em glândulas submandibulares de ratos produz carcinomas e sarcomas, associados ou não. Apesar de bem estudada a histopatologia deste tipo de carcinogênese, pouco se sabe em relação a imunoistoquímica das neoplasias. Este estudo se propõe a revisar pesquisa pregressa realizada por Mainenti (2006), na tentativa de melhor entender a formação de tumores induzidos por DMBA. O estudo original diagnosticou lesões não neoplásicas, principalmente sialadenites, e tumores como carcinomas, carcinossarcomas e um caso de sarcoma. O presente trabalho fez uso de lâminas e material de estoque em formol. Foram comparadas as lâminas originais com novas lâminas coradas em hematoxilina e eosina. Para a pesquisa de fibras colágenas utilizou-se a coloração pelo método do tricrômico de Gomori. A imunoistoquímica foi realizada utilizando os seguintes anticorpos:AE1/AE3, vimentina, _-SMA, calponina, desmina, miogenina, S-100,CerbB-2 e EMA. Certas lesões, previamente diagnosticadas como sialadenites, foram reclassificadas como carcinomas. A imunoistoquímica foi positiva para os seguintes anticorpos: AE1/AE3 para neoplasia epitelial, vimentina para tecido conjuntivo e tumores mesenquimais, _-SMA e calponina para poucas células fusiformes pleomórficas no estroma dos carcinomas e nas neoplasias mesenquimais. Concluiu-se que a imunoistoquímica revelou diferenciação muito sugestiva de miofibroblastos no estroma dos carcinomas e miofibroblastos compondo o fibrossarcoma e os carcinosarcomas. Estas células produziram colágeno revelado pelo tricrômico de Gomori. O componente epitelial neoplásico foi sugerido como derivado de células luminais.